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酶标板封闭前的清洗

酶标板或者又叫做一次性(细胞细菌)培养板,基本都是透明颜色,PS(聚苯乙烯)材料做成,一般根据酶标板与蛋白和其它分子结合能力的不同,分为高结合力,中结合力和氨基化的。

酶标板

1)高结合力

此种酶标板,表面经处理后,其蛋白结合能力大大增强,可达300-400ng lgG/cm2主要结合的蛋白分子量>10kD。使用该类酶标板可提高敏感性,并可相对减少包被蛋白的浓度和用量,不足之处为较易产生非特异性反应。抗原或抗体包被后,以非离子去污剂无法有效地封闭未结合蛋白的部位,需使用蛋白作为封闭剂。

2)中结合力

此类酶标板经表面疏水键被动与蛋白结合,适合作为分子量>20kD的大分子蛋白的固相载体,其蛋白结合能力为200~300ng 1gG/cm2,由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性,适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体,可降低潜在的非特异性交叉反应。该类板可以惰性蛋白或非离子去污剂作为封闭液。

3)氨基化

这种酶标板经表面改性处理后拥有带正电荷的氨基,其疏水键由亲水键取代。该类酶标板适合作为小分子蛋白的固相载体。使用合适的缓冲液和pH值,其表面可通过离子键与带负电荷的小分子结合。由于其表面的亲水特性和可通过其它交联剂共价结合的能力,可用于固定溶于Triton-100Tween 20等去污剂的蛋白分子。该类板的缺陷为由于降低了疏水性,一部分蛋白分子无法结合;此外,其表面需有效地封闭。由于亲水和共价的表面特性,使用的封闭液必须能够与非反应性氨基基团和所选择的交联剂中任何功能基团发生作用。

等离子体清洗可以对酶标板材料的整体、局部或复杂结构部分进行清洗;在完成清洗去污的同时,还可以改善材料本身的表面性能。如提高表面的润湿性能、改善膜的黏着力等,这在酶标板的加工制造过程中是非常重要的

聚苯乙烯酶标板经等离子接枝处理后,能在基体表面引入醛基、氨基、环氧基等活性官能团,提高基体表面的浸润性、表面能,使酶牢牢地固定在载体上面,提高酶的固定性。经达因笔测试,PS材料处理前是38达因左右,处理后是72达因左右,表面张力值得到极大的改善。